济南星宝生物技术有限公司

说明：考马斯亮兰法（Bradford法），是目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一。考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。

包装：

货号Cat：

包装规格

微孔检测

WB041

考马斯亮兰法 25 ml

BSA（1mg/ml） 5ml

125次

WB042

考马斯亮兰法 100ml

BSA（1mg/ml） 25ml

500次

保存： BSA蛋白标准-20℃ 其他2℃-8℃

实验步骤

1. 从冰箱取出考马斯亮兰溶液，平衡至室温并混匀；预热分光光度计20分钟或酶标仪。

2. 以分光光度计测;准备九支管，分别编号，按下列顺序加样。

编号		1	2	3	4	8	6	7	8	9
去离子水µl		100	90	80	60	40	20	0
蛋白标准µl		0	10	20	40	60	80	100
样品µl									100	100
考马斯亮兰溶液ml		3	3	3	3	3	3	3	3	3
混匀、，2~5分钟后，以第1号试管为空白对照595nm，测定各样品收值A595，样品管8、9取平均值
相当浓度mg/ml	0		0.1	0.2	0.4	0.6	0.8	1.0

注：样品和试剂比可以按比例放大或缩小。

微孔检测时，可以按比例缩小，但总体积不小于100ul。

性能指标：

在20～1200ug/ml有着比较好的线性。当吸光度大于0.8A时，请把样本稀释后再做。

注意：

1.最好使用塑料或玻璃比色皿。如使用石英比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇荡洗，以洗去染色用完后可以乙醇反复清洗。塑料比色皿决不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。

2.本方法标准曲线有轻微的非线性，因而不能用Beer定律进行计算，而只能用标准曲线来测定

3.比色顺序从蛋白浓度低的管开始，中间不必清洗比色杯，以免影响结果。

4.疏水蛋白或粘蛋白，可能与染料发生沉淀，加入等体积1N NaOH 可以消除。

5.如果知道样品的蛋白大体浓度，可以采用相近的3管做标准曲线。

6.由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用 g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。

7.有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和0.1N的NaOH。（如同0.1N的酸干扰Lowary法一样）

﹡﹡﹡﹡﹡本品具有腐蚀性，如有皮肤或眼睛接触，请用大量水冲洗或就医﹡﹡﹡﹡﹡



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