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      PCR产物DNA小量纯化试剂盒

GalaxyBio Code包装规格价格说明书购物车
FR03050Tests220元
FR040200Tests800元

产品简介

PCR产物DNA小量纯化试剂盒

            (硅胶膜·离心柱型)

 

 

 

试剂盒内容

50 货号Cat:FR030

200次货号Cat:FR040

溶液PB     Buffer PB

30 ml

140ml

漂洗缓冲液 Wash Buffer

15 ml

30 ml x2

洗脱缓冲液 Elution Buffer

15 ml

15 ml

吸附柱     Spin Column

50

200

收集管   Collection Tube(2ml)  

50

200

说明书     Specification

1

1

 

贮存条件:

室温,有效期一年。

 

产品简介     

※  本公司与由美国公司通力合作,由美方公司提供全方面技术、关键纯化材料,将核酸纯化等系列产品,在国内推广,实现了进口产品本土化生产。每种产品通过严格的技术把关,已达到进口产品的品质,而价格上却是国产试剂盒的价位。

※  纯化得率高:70bp~40kp的DNA带高达50~90%,可纯化1μg~15μg的DNA片段。

※  采用进口硅胶膜,最大吸附量为15 ug,实验结果可重复性好。

  ※  纯度高:1.8<A260/A280<2.0,保证后续实验结果的可靠性和重复性

  ※  操作简便、快速,只需10min即可完成全部操作;

※  直接可以用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。

 

操作步骤:

1. 试验前准备及注意事项

 a. 漂洗液PW1和PW2 使用前请按标签加入无水乙醇并标示。

 b. 使用前检查溶胶PB是否有沉淀,若有请于37℃或微波炉稍加热溶解。

2.加1~5体积的Buffer PB到1体积的PCR产物里,混匀.不需要除去矿物油和石蜡油.

注意:对于大于200bp的片断,可以加1体积的Buffer PB1体积的PCR产物里;对于小于200bp的片断,加大体积Buffer PB,以便获得更高的回收率。如50ul的PCR产物,加入250ul Buffer PB,一般Buffer PB体积越大,回收率越高。对于更小片断的PCR产物,可以再补加总体积1/4无水乙醇或异丙醇,以便获得更高的回收率。

3.把上述PCR产物全部转入吸附柱,室温放置1min,然后12000rpm离心1min.

4.弃去过滤液,加入700ul漂洗缓冲液 Wash Buffer,室温放置1min,然后12000rpm离心1min.注意:确保漂洗缓冲液 Wash Buffer已加入无水乙醇

5.弃去过滤液,加500ul漂洗缓冲液 Wash Buffe,12000rpm离心1 min.

 

6.弃去过滤液,离心2 min,尽量去除残留乙醇.

7.打开吸附柱,室温2 min,挥发残留乙醇.

注意:残留乙醇可能影响后续试验。

8.将Spin Column按置于新的洁净的1.5ml的离心管上,在吸附柱Spin Column膜的中央处加入20-100μl的pH8.5灭菌水或洗脱缓冲液 Elution Buffer,室温静置1分钟,12000rpm离心1分钟洗脱DNA,可立即用于下游分子生物学实验或-20℃保存。

    注意:洗脱缓冲液 Elution Buffer组成为10mM Tris-HCI (pH8.5),不影响测序和酶切反应;可以pH8.5灭菌水替代;也可以含有1 mM EDTABuffer TE洗脱,有助于稳定DNA.洗脱液加热60使用时有利于提高洗脱液效率,如果提取的质粒>10kb,请将洗脱液预热至60,并适当延长洗脱时间。

DNA浓度和纯度检测

   OD260值为1,相当于50ug/ml的双链DNA。也可以通过DNA Marker通过琼脂糖凝胶电泳半定量。

   OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8,如果洗脱时不使用缓冲液,而使用去离子水,由于受PH值和离子浓度的影响,比值会偏低。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

常见问题分析及解决方案

问 题

可能原因

解决方法

 未得到DNA片断

 

洗脱液EB使用不当

 

漂洗液PW1和PW2使用前未加无水乙醇

 

样品起使量少

步骤8中,请将洗脱液EB加至吸附柱硅胶膜的中间部位,以确保完全渗入吸附材料中

请按试剂瓶标签说明在漂洗液PW1和PW2中加无水乙醇,并做好标记.

 

DNA产量低

洗脱效率不高

使用NAOH将灭菌双蒸水PH调至7.0-8.5后再进行洗脱.

建议将洗脱液EB用1.5ml离心管分装后使用,以避免被高盐或酸性溶液污染.

纯化得到的DNA片断不单一

PCR引物二聚体片断较大

PCR产物含有非特异性扩增片段

改用琼脂糖凝胶回收试剂盒纯化片段.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


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