PCR产物DNA小量纯化试剂盒
(硅胶膜·离心柱型)
试剂盒内容 |
50次 货号Cat:FR030 |
200次货号Cat:FR040 |
溶液PB Buffer PB |
30 ml |
140ml |
漂洗缓冲液 Wash Buffer |
15 ml |
30 ml x2 |
洗脱缓冲液 Elution Buffer |
15 ml |
15 ml |
吸附柱 Spin Column |
50 |
200 |
收集管 Collection Tube(2ml) |
50 |
200 |
说明书 Specification |
1 |
1 |
贮存条件:
室温,有效期一年。
产品简介
※ 本公司与由美国公司通力合作,由美方公司提供全方面技术、关键纯化材料,将核酸纯化等系列产品,在国内推广,实现了进口产品本土化生产。每种产品通过严格的技术把关,已达到进口产品的品质,而价格上却是国产试剂盒的价位。
※ 纯化得率高:70bp~40kp的DNA带高达50~90%,可纯化1μg~15μg的DNA片段。
※ 采用进口硅胶膜,最大吸附量为15 ug,实验结果可重复性好。
※ 纯度高:1.8<A260/A280<2.0,保证后续实验结果的可靠性和重复性
※ 操作简便、快速,只需10min即可完成全部操作;
※ 直接可以用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
操作步骤:
1. 试验前准备及注意事项
a. 漂洗液PW1和PW2 使用前请按标签加入无水乙醇并标示。
b. 使用前检查溶胶PB是否有沉淀,若有请于37℃或微波炉稍加热溶解。
2.加1~5体积的Buffer PB到1体积的PCR产物里,混匀.不需要除去矿物油和石蜡油.
注意:对于大于200bp的片断,可以加1体积的Buffer PB到1体积的PCR产物里;对于小于200bp的片断,加大体积Buffer PB,以便获得更高的回收率。如50ul的PCR产物,加入250ul Buffer PB,一般Buffer PB体积越大,回收率越高。对于更小片断的PCR产物,可以再补加总体积1/4无水乙醇或异丙醇,以便获得更高的回收率。
3.把上述PCR产物全部转入吸附柱,室温放置1min,然后12000rpm离心1min.
4.弃去过滤液,加入700ul漂洗缓冲液 Wash Buffer,室温放置1min,然后12000rpm离心1min. 注意:确保漂洗缓冲液 Wash Buffer已加入无水乙醇
5.弃去过滤液,加500ul漂洗缓冲液 Wash Buffe,12000rpm离心1 min.
6.弃去过滤液,离心2 min,尽量去除残留乙醇.
7.打开吸附柱,室温2 min,挥发残留乙醇.
注意:残留乙醇可能影响后续试验。
8.将Spin Column按置于新的洁净的1.5ml的离心管上,在吸附柱Spin Column膜的中央处加入20-100μl的pH8.5灭菌水或洗脱缓冲液 Elution Buffer,室温静置1分钟,12000rpm离心1分钟洗脱DNA,可立即用于下游分子生物学实验或-20℃保存。
注意:洗脱缓冲液 Elution Buffer组成为10mM Tris-HCI (pH8.5),不影响测序和酶切反应;可以pH8.5灭菌水替代;也可以含有1 mM EDTA的Buffer TE洗脱,有助于稳定DNA.洗脱液加热60℃使用时有利于提高洗脱液效率,如果提取的质粒>10kb,请将洗脱液预热至60℃,并适当延长洗脱时间。
DNA浓度和纯度检测
OD260值为1,相当于50ug/ml的双链DNA。也可以通过DNA Marker通过琼脂糖凝胶电泳半定量。
OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8,如果洗脱时不使用缓冲液,而使用去离子水,由于受PH值和离子浓度的影响,比值会偏低。
常见问题分析及解决方案
问 题 |
可能原因 |
解决方法 |
|
|
步骤8中,请将洗脱液EB加至吸附柱硅胶膜的中间部位,以确保完全渗入吸附材料中
请按试剂瓶标签说明在漂洗液PW1和PW2中加无水乙醇,并做好标记.
|
DNA产量低 |
洗脱效率不高 |
使用NAOH将灭菌双蒸水PH调至7.0-8.5后再进行洗脱.
建议将洗脱液EB用1.5ml离心管分装后使用,以避免被高盐或酸性溶液污染. |
纯化得到的DNA片断不单一 |
PCR引物二聚体片断较大
PCR产物含有非特异性扩增片段 |
改用琼脂糖凝胶回收试剂盒纯化片段. |
|