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      首页产品分类目录分子生物质粒纯化→质粒DNA中量提取试剂盒

      质粒DNA中量提取试剂盒

GalaxyBio Code包装规格价格说明书购物车
FP00110680元
FP091502800元

产品简介

质粒DNA中量提取试剂盒

                   (离心柱型)

 

试剂盒内容

10次 货号cat:FP000

50次货号cat:FP090

RNaseA (10mg/ml)   

300ul×5

300ul×25

溶液S1    Resuspension Buffer

125 ml

125 ml×5

溶液S2    Lysis Buffer 

125ml

125 ml×5

溶液S3    Neutralization Buffer

45ml

45 ml×5

树脂溶液  (Matrix)

125 ml

125×5

漂洗缓冲液W1 Wash Buffer W1

75 ml

75 ml×5

漂洗缓冲液W2 Wash Buffer W2

30 ml

30 ml×5

洗脱缓冲液 Elution Buffer

15 ml

145ml×5

过滤柱    Filter Column

10

50

吸附柱     Spin Column

10

50

收集管   Collection Tube(50ml)  

20

100

说明书     Specification

1

1

 

贮存条件:

室温,有效期一年。溶液S1加入RNase后2-8℃保存

产品简介     

※  本公司与由美国公司通力合作,由美方公司提供全方面技术、关键纯化材料,,将核酸纯化等系列产品,在国内推广,实现了进口产品本土化生产。每种产品通过严格的技术把关,已达到进口产品的品质,而价格上却是国产试剂盒的价位。

※  本试剂盒采用经典的SDS碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅胶膜和树脂在高盐低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐,高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅胶膜和树脂上洗脱。

※  采用进口硅胶膜和树脂,吸附量大,产率高,实验结果可重复性好。

※  溶液中添加了作用指示剂,使每一步作用程度一目了然。

  ※  不需要使用有毒的苯酚,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。

※  溶液S1,加入了特定酶稳定剂,加入RNase A后, 4℃保存至少一年不会失活

  ※  快速、方便,从250~500 ml大肠杆菌LB(Luria Bertani)培养液中,可快速提取500~1000ug纯净的高拷贝质粒DNA,提取率达85~90%。

  ※  获得的质粒产量高,超螺旋比例高、纯度好。直接可以用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。

操作步骤:

1.试验前准备及注意事项

 a. 溶液S1 Resuspension Buffer 使用前将RNase A全部加入(使用前离心),均匀混合后4℃保存并标示。

     b. Wash Buffer W1和Wash BufferW2 使用前请按标签加入无水乙醇并标示。

     c. 使用前检查溶液S2、溶液S3各试剂是否有沉淀,若有请于37℃或微波炉稍加热溶解。S2可以在手握不烫手时使用,S3室温使用。

     d. 溶液S2 Lysis Buffer及溶液S3用后盖紧瓶盖。

2.  收菌  取150~250ml 在LB 培养基中培养过夜的高拷贝数质粒菌液,或500 ml 过夜培养的低拷贝质粒/Cosmid菌液(若使用丰富培养基,菌液体积应减半或更少),≥3,000×g 离心10 min,弃上清。将离心管倒置于纸巾上数分钟,除尽上清。

3.  重悬菌液  加10 ml Buffer S1 悬浮细菌沉淀,悬浮需均匀,不应留有小的菌块。

* 确认Buffer S1 中已加入RNase A请充分重悬细菌,若不充分会导致碱裂解不完全。

4.  碱裂解  加10 ml Buffer S2,温和并充分地上下翻转8-10 次混合均匀使菌体充分裂解,直至形成透亮的溶液。

* Buffer S2 使用后立即盖紧瓶盖,以免空气中的CO2 中和Buffer S2 中的NaOH,降低溶菌效率。

* 避免剧烈摇晃,否则将导致基因组DNA 的污染。

* 此步骤不宜超过5 min

* Buffer S2 后裂解液会变成蓝色,充分混匀以保证形成均一的蓝色溶液。

5.  中和  加4ml的Buffer S3,温和并充分地上下翻转10-12 次混合均匀,直至形成紧实的凝集块,室温放置5 min。

* 加入Buffer S3 后应立即混合,以避免形成局部的凝结块。

* 避免剧烈摇晃,否则将导致基因组DNA 的污染。

* Buffer S3 后蓝色会消失,充分混匀以保证悬浮物中蓝色均消失。

6. 过滤 10,000×g 离心10 min。将上清全部转入过滤柱,10,000×g 离心(4°C)2 min,如过滤不完全,可以适当延长离心时间。

7. 加入树脂 用力振荡树脂胶液,使得树脂完全悬浮均匀。加入约12 ml树脂溶液,混匀。

8. 柱结合  将上述操作的混合树脂溶液,分批全部转入转移至吸附柱中,10,000×g 离心2 min,如过滤不完全,可以适当延长离心弃滤液。

9. 漂洗  将13ml的Wash Buffer W1 加入吸附柱中,10,000×g 离心(4°C)2 min,弃滤液。

10. 再漂洗  将13ml的Wash Buffer W1 加入吸附柱中,10,000×g 离心(4°C)2 min,弃滤液。 空柱10,000×g 离心(4°C)2 min,除去残留乙醇。

11. 洗脱  将大量制备管置于洁净的50 ml 离心管中,在制备管的膜中央上加1.5 ml Elution Buffer 或pH8.5去离子水,室温 静置5 min。≥6,000×g 离心5 min 收集质粒DNA。

    注意:Elution Buffer 组成为2.5mM Tris-HCI (pH8.5),不影响测序和酶切反应,。把水或洗脱液加热于65℃使用时有利于提高洗脱液效率,如果提取的质粒>10kb,请将洗脱液预热至65℃,并适当延长洗脱时间。

质粒DNA浓度和纯度检测

   OD260值为1,相当于50ug/ml的双链DNA。也可以通过DNA Marker通过琼脂糖凝胶电泳半定量。

   OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8,如果洗脱时不使用缓冲液,而使用去离子水,由于受PH值和离子浓度的影响,比值会偏低。

 

 

 

 

 

 

 

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