长臂生物素标记试剂盒
Long-armed Biotin Label Kit
Cat |
试剂盒组分 |
规格 |
SA821 |
REAGENTⅠ长臂生物素 |
1mg×10 |
SA822 |
REAGENTⅠ长臂生物素 |
1mg×20 |
SA823 |
REAGENT Ⅱ 溶媒 |
1.5ml |
SA814 |
REAGENT Ⅳ 2MNa2CO3 |
1.5ml |
贮存:-20℃保存,稳定期1年
操作方法:
1) 准备待标抗体、HRP等等:
将待标抗体配成1mg/m1溶液。
2)生物素的活化:
从-20℃取出REAGENT Ⅱ溶媒,37℃水浴5分钟至完全溶解,取100ul,加入到REAGENT Ⅰ生物素中,轻轻吹打至完全溶解。混匀室温放置60分钟。
3)标记:
将活化的生物素全部转入1ml待标物中,加入REAGENT Ⅳ100ul, PH约在8.0-9.0,室温震荡1~3h。(1小时能完成95%的反应,2小时99%,)
4) 透析:4℃条件下使上述混合液体以PBS透析过夜,中间换液若干次(如有沉淀,离心除去后再透析)。
5) 保存:加等体积甘油,-20℃分装存放。
应用范围:
用于HRP、蛋白、核酸及核酸探针、抗体、抗原的标记,也适用含有氨基(NH4-)的小分子标记。
特点:
1.操作简便,标记率高,活性好。
2. 易于保存和运输,减少生物素的失活。
注意事项:
1)透析袋选择:
一定注意透析袋孔径的大小,防止蛋白过多渗出。一般透析袋孔径约为待标记蛋白分子量的1/10。如HRP 分子量是44KD,选择3k;抗体150KD,选择15K。
2)透析要充分,防止游离生物素,竞争反应。
3)本方法是针对待标记物的氨基进行标记。因此待标记物的缓冲液,如果是存在于硫酸铵、甘氨酸或Tris等等有氨基的缓冲液中,需以PBS缓冲液充分透析,防止干扰标记。
4)标记时,如果PH偏酸、低于在7.5,再加入REAGENT Ⅳ100ul或适量。
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