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      小片段DNA小量回收试剂盒

GalaxyBio Code包装规格价格说明书购物车
FR05050420元
FR060100760元

产品简介

小片段DNA小量回收试剂盒
           (结合树脂&离心柱型)

试剂盒内容

50 货号cat:FG050

200次货号cat:FG060

吸附柱       Spin Column

50

200

平衡溶液EB  EquilibrationBuffer

15ml

50ml

结合树脂液   Matrix

10 ml

50 ml

溶液W2     Buffer W2

15 ml

30 ml

溶液TE      TE Buffer

15 ml

15 ml

说明书       Specification

1

1



贮存条件:
室温,有效期三年。
产品简介      
※  能从PCR或酶切缓冲液中回收小片段DNA,8bp 的DNA小片段回收率达60%。20-100bp可达80%。从凝胶回收小片段,请订购本公司产品Cat:FG110
※  采用进口硅胶膜和吸附树脂,最大吸附量为60ug,实验结果重复性好。

操作步骤:
1. 试验前准备及注意事项
 a.  结合树脂液Matrix  使用前请按标签加入无水乙醇并标示。如果片段过小,可以加入双倍的无水乙醇,以提高小片段的回收率。
 b.  溶液W2 使用前请按标签加入无水乙醇并标示;。
2. 吸附柱平衡柱  吸附柱加入200ul平衡液,室温4min, 12,000转/分 离心60秒,弃去离心管中液体。  
3.吸附 结合树脂液加入乙醇后,剧烈混匀。加7倍体积的结合树脂液乙醇溶液于样品中(7倍于样品),混匀。转入吸附柱中, 12,000转/分 离心30秒,弃去离心管中液体。(如果片段过小,结合树脂液可以加入双倍的无水乙醇,以提高小片段的回收率)。
4. 漂洗  将700μl的Buffer W2加入吸附柱Spin Column中,12000rpm离心30-60秒,弃滤液。
5. 再漂洗  将500μl的Buffer W2加入Spin Column中,12000rpm离心30-6秒,弃滤液。 空柱12000rpm再离心2分钟,除去残留乙醇。
6. 洗脱  将Spin Column按置于新的洁净的1.5ml的离心管上,在吸附柱Spin Column膜的中央处加入30-100μl的灭菌水(pH8.5)或洗脱缓冲液TE Buffer,室温静置1分钟,12000rpm离心1分钟洗脱DNA,可立即用于下游分子生物学实验或-20℃保存。
    注意:TE Buffer组成为2.5mM Tris-HCI (pH8.5),不影响测序和酶切反应..

把水或洗脱液加热于60℃使用时有利于提高洗脱液效率, 

DNA浓度和纯度检测
   OD260值为1,相当于50ug/ml的双链DNA。
   OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8,如果洗脱时不使用缓冲液,而使用去离子水,由于受PH值和离子浓度的影响,比值会偏低。

 

常见问题分析及解决方案

问 题

可能原因

解决方法

 未得到DNA片断

 

洗脱液TE Buffer

漂洗缓冲液  Buffer W2 用前未加无水乙醇

样品起使量少

步骤6中,请将洗脱液TE Buffer加至吸附柱Matrix的中间部位,以确保完全渗入吸附材料中

请按试剂瓶标签说明在漂洗漂洗缓冲液中加无水乙醇,并做好标记.

小片段得量过少

DNA产量低

片段太小

在结合树脂液加入双倍无水酒精

洗脱效率不高

使用NAOH将灭菌双蒸水PH调至8.5后再进行洗脱.

建议将洗脱缓冲液用1.5ml离心管分装后使用,以避免被高盐或酸性溶液污染.结合树脂液 Matrix没有完全悬起。

纯化得到的DNA片断不单一

PCR引物二聚体片断较大

PCR产物含有非特异性扩增片段

改用琼脂糖凝胶回收试剂盒纯化片段Cat:FG110

 

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