小片段DNA小量回收试剂盒 (结合树脂&离心柱型)
试剂盒内容 |
50次 货号cat:FG050 |
200次货号cat:FG060 |
吸附柱 Spin Column |
50 |
200 |
平衡溶液EB EquilibrationBuffer |
15ml |
50ml |
结合树脂液 Matrix |
10 ml |
50 ml |
溶液W2 Buffer W2 |
15 ml |
30 ml |
溶液TE TE Buffer |
15 ml |
15 ml |
说明书 Specification |
1 |
1 |
贮存条件: 室温,有效期三年。 产品简介 ※ 能从PCR或酶切缓冲液中回收小片段DNA,8bp 的DNA小片段回收率达60%。20-100bp可达80%。从凝胶回收小片段,请订购本公司产品Cat:FG110 ※ 采用进口硅胶膜和吸附树脂,最大吸附量为60ug,实验结果重复性好。
操作步骤: 1. 试验前准备及注意事项 a. 结合树脂液Matrix 使用前请按标签加入无水乙醇并标示。如果片段过小,可以加入双倍的无水乙醇,以提高小片段的回收率。 b. 溶液W2 使用前请按标签加入无水乙醇并标示;。 2. 吸附柱平衡柱 吸附柱加入200ul平衡液,室温4min, 12,000转/分 离心60秒,弃去离心管中液体。 3.吸附 结合树脂液加入乙醇后,剧烈混匀。加7倍体积的结合树脂液乙醇溶液于样品中(7倍于样品),混匀。转入吸附柱中, 12,000转/分 离心30秒,弃去离心管中液体。(如果片段过小,结合树脂液可以加入双倍的无水乙醇,以提高小片段的回收率)。 4. 漂洗 将700μl的Buffer W2加入吸附柱Spin Column中,12000rpm离心30-60秒,弃滤液。 5. 再漂洗 将500μl的Buffer W2加入Spin Column中,12000rpm离心30-6秒,弃滤液。 空柱12000rpm再离心2分钟,除去残留乙醇。 6. 洗脱 将Spin Column按置于新的洁净的1.5ml的离心管上,在吸附柱Spin Column膜的中央处加入30-100μl的灭菌水(pH8.5)或洗脱缓冲液TE Buffer,室温静置1分钟,12000rpm离心1分钟洗脱DNA,可立即用于下游分子生物学实验或-20℃保存。 注意:TE Buffer组成为2.5mM Tris-HCI (pH8.5),不影响测序和酶切反应..
把水或洗脱液加热于60℃使用时有利于提高洗脱液效率,
DNA浓度和纯度检测 OD260值为1,相当于50ug/ml的双链DNA。 OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8,如果洗脱时不使用缓冲液,而使用去离子水,由于受PH值和离子浓度的影响,比值会偏低。
常见问题分析及解决方案
问 题 |
可能原因 |
解决方法 |
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洗脱液TE Buffer
漂洗缓冲液 Buffer W2 用前未加无水乙醇
样品起使量少 |
步骤6中,请将洗脱液TE Buffer加至吸附柱Matrix的中间部位,以确保完全渗入吸附材料中
请按试剂瓶标签说明在漂洗漂洗缓冲液中加无水乙醇,并做好标记. |
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片段太小 |
在结合树脂液加入双倍无水酒精 |
洗脱效率不高 |
使用NAOH将灭菌双蒸水PH调至8.5后再进行洗脱.
建议将洗脱缓冲液用1.5ml离心管分装后使用,以避免被高盐或酸性溶液污染.结合树脂液 Matrix没有完全悬起。 |
纯化得到的DNA片断不单一 |
PCR引物二聚体片断较大
PCR产物含有非特异性扩增片段 |
改用琼脂糖凝胶回收试剂盒纯化片段Cat:FG110. |
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