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      T4 DNA Ligase

GalaxyBio Code包装规格价格说明书购物车
FM01135000U95元
FM01235000UX5380元

产品简介

T4 DNA Ligase

 

 

 

 

 

包装内容

100次

Cat:FP015

500次

Cat:FP010

T4 DNA Ligase(350 U/μl)

35,000 Units

35,000 UnitsX5

10×T4 DNA Ligase Buffer

1 ml

1ml X5

 

贮存条件:

-20℃保存

 

产品简介     

该酶催化相邻DNA链的5’-P末端和3’-OH末端以磷酸二酯键结合的反应,需ATP作辅酶。本酶不仅可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的DNA的连接,也可以催化DNA与RNA之间以及少数RNA之间的连接,修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交链中的单链切口

 

起源

Escherichia coli carrying the plasmid that enable highly expression of T4 DNA Ligase gene

 

酶贮存溶液:

10 mM Tris-HCl (pH 7.5),

0.1 mM EDTA,

50 mM KCl,

1 mM DTT,

50% Glycerol

and 200 μg/ml Nuclease free BSA.

 

活性定义

在20 μl的连接反应体系中,6 μg的λDNA-Hind III的分解物在16℃下反应30分钟时,有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

本酶的1 U相当于ATP-PPi交换反应中0.008 Weiss Unit。    

 

 

 

 

1) 2,000 U的本酶和1 μg的λ-Hind III片段在37℃下反应24小时,DNA的电泳谱带不发生变化。

2) 2,000 U的本酶和1 μg的Supercoiled pBR322 DNA在37℃下反应24小时,DNA的电泳谱带不发生变化。

3) 2,000 U的本酶和1 μg的16S,23S rRNA在37℃下反应24小时,RNA

 

1)DNA片段和载体DNA的连接。

2)DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。

 

使用注意

连接反应因末端碱基顺序的不同而反应速度各异,一般有下列倾向:

突出末端:Hind III>Pst I>EcoR I>BamH I>Sal I

平滑末端:Hae III>Alu I>Hinc II>Sma I

EcoR V>Sca I>Pvu II>Nru I

其中连接Hind III末端的速度约为连接Sal I末端速度的10~40倍;

而连接Hae III末端的速度约为连接Sma I末端速度的5~10倍。

 

附带10×Buffer组成(保存:-20℃)

10×T4 DNA Ligase Buffer

Tris-HCl(pH 7.6) 660 mM

MgCl 66 mM

DTT 100 mM

ATP 1 mM

* Buffer在融解时,如果出现少量沉淀属正常现象,请于37℃保温溶解后使用

使用举例

DNA片段和载体DNA的连接

1. 在微量离心管中制备下列连接反应液。

10×T4 DNA Ligase Buffer          2.5 μl

DNA片段*                       约0.3 pmol

载体DNA**                     约0.03 pmol

T4 DNA Ligase                    1 μl

dH2O                         up to 25 μl

* DNA片段的摩尔数应控制在载体DNA摩尔数的3~10倍。

** 平滑末端的载体与DNA片段进行连接时,应首先将载体进行去

磷酸化处理,以防止其自身环化。

2. 16℃过夜反应。

3. 加入2.5 μl(1/10量)的3 M CH3COONa(pH5.2)。

4. 加入62.5 μl(2.5倍量)的冷无水乙醇,-20℃放置30~60分钟。

5. 离心回收沉淀,用70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。

6. 25~50 μl TE溶解,10~20 μl转化至100 μl的感受态细胞中。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


   

 

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